protocole de culture de cellules trypsine edta

Procédure

1. Retirer le milieu du récipient de culture par aspiration et laver la monocouche avec une solution saline exempte de Ca²⁺ et Mg²⁺ pour éliminer toute trace de sérum. ...
2. Distribuer suffisamment de solution de trypsine ou de trypsine / EDTA dans le (s) récipient (s) de culture pour recouvrir complètement la monocouche de cellules et placer dans un incubateur à 37 ° C pendant ~ 2 minutes.

1. Comment préparer la solution de trypsine EDTA pour la culture cellulaire?
2. Pourquoi la trypsine EDTA est utilisée en culture cellulaire?
3. Comment se fait la sous-culture des cellules adhérentes en utilisant la trypsine EDTA et EDTA seuls?
4. Comment décongeler la trypsine EDTA?
5. La trypsine peut-elle tuer les cellules?
6. Que pouvons-nous ajouter à la culture pour inhiber la trypsine?
7. L'EDTA peut-il tuer les cellules?
8. Pourquoi le sérum inhibe-t-il la trypsine?
9. L'EDTA est-il toxique pour les cellules?
10. Pourquoi utilisons-nous la trypsine?
11. Pourquoi lavez-vous les cellules avec du PBS?
12. Pourquoi lavez-vous les cellules avec du PBS avant d'ajouter de la trypsine?

Comment préparer la solution de trypsine EDTA pour la culture cellulaire?

Ajouter 12 à 15 ml de milieu de culture cellulaire frais dans un nouveau flacon et équilibrer ce milieu au pH et à la température appropriés. Recueillir la suspension cellulaire, la compter et / ou la diviser et distribuer les cellules dans le flacon nouvellement préparé. Reportez-vous à la fiche produit de la lignée cellulaire pour connaître les taux de repiquage recommandés.

Pourquoi la trypsine EDTA est utilisée en culture cellulaire?

L'EDTA agit comme un chélateur de métal, qui est ajouté aux solutions de trypsine pour améliorer l'activité. L'EDTA est ajouté pour éliminer le calcium et le magnésium de la surface cellulaire, ce qui permet à la trypsine d'hydrolyser des liaisons peptidiques spécifiques. La principale raison d'utiliser l'EDTA avec la trypsine est d'éliminer l'adhérence cellule à cellule.

Comment se fait la sous-culture des cellules adhérentes en utilisant la trypsine EDTA et EDTA seuls?

Pipeter la trypsine / EDTA sur la monocouche de cellules lavées en utilisant environ 1 ml par 25 cm2 de surface. Faites tourner le ballon pour couvrir la monocouche de trypsine. Décantez l'excès de trypsine. Remettre le flacon dans l'incubateur et laisser reposer 2 à 10 minutes.

Comment décongeler la trypsine EDTA?

Retirer la solution de trypsine / EDTA du stockage et le placer pendant une nuit entre 2 ° C et 8 ° C. 2. Transférer le flacon dans un bain-marie à 37 ° C et agiter doucement le flacon pour mélanger les solutés. Ne pas conserver la solution de trypsine / EDTA à 37 ° C plus longtemps que nécessaire.

La trypsine peut-elle tuer les cellules?

L'incubation de cellules avec une concentration de trypsine trop élevée pendant une période trop longue endommagera les membranes cellulaires et tuera les cellules.

Que pouvons-nous ajouter à la culture pour inhiber la trypsine?

La trypsine est inhibée par le sérum qui fournit les cations divalents comme le calcium et le magnésium qui jouent un rôle dans le processus de signalisation intra et intercellulaire, c'est-à-dire en formant des CAM, de sorte que le sérum est généralement ajouté au récipient une fois que les cellules se sont détachées - cela peut être confirmé par l'observation sous un microscope.

L'EDTA peut-il tuer les cellules?

une. Utilisez 5 mM d'EDTA ou plus REMARQUE: trop d'EDTA peut tuer vos cellules b. Accutase et Accumax sont des produits de dissociation cellulaire vendus par Innovative Technologies qui peuvent aider à maintenir des suspensions unicellulaires.

Pourquoi le sérum inhibe-t-il la trypsine?

Salut, la trypsine est une endopeptidase, qui digère les protéines. Dans le processus de trypsinisation, les protéines extracellulaires sont digérées, ce qui conduit au détachement des cellules du fond du récipient de culture. ... Le sérum contient de nombreux inhibiteurs de protéase, qui arrêtent la trypsine, principalement l'alpha-1-antitrypsine. J'espère que cela t'aides!

L'EDTA est-il toxique pour les cellules?

Aucune toxicité n'a été observée lorsque les cellules étaient exposées à 100 μM de Zn- ou Fe-EDTA, mais la même concentration de Cu-EDTA était aussi toxique que le Na-EDTA. Une exposition continue des cultures cellulaires à 5 microM Na- ou Zn-EDTA pendant jusqu'à 7 semaines n'a donné aucune indication de toxicité.

Pourquoi utilisons-nous la trypsine?

La trypsine est une enzyme qui nous aide à digérer les protéines. Dans l'intestin grêle, la trypsine décompose les protéines, poursuivant le processus de digestion qui a commencé dans l'estomac. Elle peut également être appelée enzyme protéolytique ou protéinase. La trypsine est produite par le pancréas sous une forme inactive appelée trypsinogène.

Pourquoi lavez-vous les cellules avec du PBS?

Dans la culture cellulaire pendant le spilitting PBS, un lavage est nécessaire pour éliminer le sérum du milieu afin que la trypsine puisse détacher les cellules de la plaque, sinon le sérum peut inactiver la trypsine.

Pourquoi lavez-vous les cellules avec du PBS avant d'ajouter de la trypsine?

Avant de l'ajouter aux cellules, vous devez laver le milieu de culture cellulaire, car la trypsine décomposerait également les protéines présentes dans le milieu, comme le FCS, réduisant son activité avant d'atteindre les cellules..